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內含福利 || 那些年,血清為實驗猿背的“鍋”.......

時間:2019-10-30 瀏覽次數:3

細胞培養可以說是整個生物技術產業的發展的核心,培養基的質量則是影響細胞培養的關鍵因素。在培養基的各種成分中,血清是細胞培養過程中外源添加的成分不確定的物質,血清的質量直接影響到細胞培養的效果,甚至對整個實驗的成敗起著關鍵性的作用。

 

所以,選用優質血清能夠使我們的實驗少走彎路,“贏在起跑線上”。然而,Gibco曾就血清質量做過一次調查,結果表明:使用者對血清不正確的儲存與使用方式常常導致了血清質量下降,實驗效果不理想。

 

 

那么問題來了:血清在儲存與使用過程中有哪些注意事項?如何才能保證采購的優質血清在儲存過程中不產生質量損失呢?

 

下面我整理了一些Q&A供大家參考:

 

Q:保存血清推薦的方法?

A:我們建議血清應保存在-5 ℃至-20 ℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

 

Q:如何解凍血清才不會使產品質量受損?

A:我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8 ℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻

 

Q:血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?

A:血清中沉淀物的出現有許多種原因,但比較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白 (形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400 g 稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

 

Q:為什么要熱滅活血清?

A:加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES 細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

 

Q:有必要做熱滅活嗎?

A:實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是 “小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!

 

Q:為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?

A:胎牛血清儲存在2-8 ℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20 ℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。

 

Q:如何避免沉淀物的產生?

A:我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法 (-20 ℃至4 ℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20 ℃至37 ℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

 

關于血清的儲存與使用,若您還有其他疑問,歡迎在評論區留言~

 

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