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這些注意事項對密理博超濾管的使用很重要

時間:2019-06-22 瀏覽次數:188

   密理博超濾管可用于生物樣品純化、蛋白質濃縮、脫鹽和緩沖液更換,垂直結構的膜減少了濃差極化,快速離心并可直接吸取回收樣本,濃縮倍數高達80-100倍,是樣本處理的得力助手。密理博超濾管備有四種材質的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據不同要求靈活選用。

  密理博超濾管的應用:
  1、蛋白質樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換。
  2、樣品中去垢劑的去除;雙向電泳樣品的制備。
  3、未結合標志物的去除。
  4、尿液的濃縮。
  5、核算樣品濃縮及脫鹽。
  6、法醫鑒定分析樣品的預處理。
  7、純化血清多肽做生物標志物;抗體的快速濃縮。
 
  密理博超濾管的使用注意事項:
  1、新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂的白線為準。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預冷。
  2、選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書,注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同。
  3、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer,再濃縮至1ml左右,連續三次,zui后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
  4、平衡。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾。不同離心機的轉速rpm換算成g之后,有所不同。離心機的加速度調至zui低檔,減小對膜的壓力。注意,一定要等離心機達到目的轉速之后,方可離開離心機,否則離心機出問題時,無法第一時間處理。膜與轉軸的方向根據說明書調整。在實際使用中,一般轉速開的比說明書里的要低,這樣可以延長離心管的使用壽命。
  5、前面幾步用以濃縮蛋白,如果要換Buffer,在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,輕輕加入新的Buffer,再濃縮至1ml左右,連續三次,zui后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,一般不多于500ul,也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,三次達到1000倍以上,基本上可以達到換buffer的目的。
  6、當濃縮到剩下1ml時,取50ul緩沖溶液,加入10ul流穿,看有沒變藍色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,用5mgml的BSA離心10min,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測,繼續加入剩下的蛋白液濃縮,直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發生蛋白沉淀,導致堵管。若發生沉淀,要確定沉淀的具體原因,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適;前者可用多根超濾管同時超濾,降低濃度的辦法解決,后者的方法是換不同的緩沖溶液,直到蛋白不發生沉淀為止。
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